Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF

Hauptunterschied - Nitrocellulose vs. PVDF

Western Blotting ist eine Methode, mit der spezifische Proteine aus einer Proteinprobe nachgewiesen und quantifiziert werden können. Die Zuverlässigkeit der Technik hängt von der Auswahl einer richtigen Membran für die Absorption von Proteinen aus dem Gel ab. Es gibt verschiedene Arten von mikroporösen Membranen. Nitrocellulose- und PVDF-Membranen sind zwei solche Membranen, die von den Forschern aufgrund ihrer besonderen Eigenschaften gegenüber den anderen Membrantypen bevorzugt werden. Die Auswahl zwischen Nitrocellulose oder PVDF ist eine weitere Herausforderung beim Western Blotting. Sowohl Nitrocellulose als auch PVDF haben eine hohe Proteinabsorptionskapazität. Der Hauptunterschied zwischen Nitrocellulose- und PVDF-Membranen besteht darin Nitrocellulosemembranen sind nicht in der Lage, Antikörper abzutrennen und die Membran zur Wiederaufbereitung von Antikörpern zu verwenden, während PVDF-Membranen Abstreif- und Wiederverwendungsfähigkeit besitzen.

INHALT
1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist Nitrocellulose?
3. Was ist PVDF?
4. Side-by-Side-Vergleich - Nitrocellulose vs. PVDF
5. Zusammenfassung

Was ist Nitrocellulose??

Nitrocellulose ist ein Polymer, das durch Behandeln von Cellulose mit Salpetersäure hergestellt wird, und wird zur Herstellung mikroporöser Membranen in der Molekularbiologie verwendet, insbesondere für Blotting-Techniken wie Southern-, Northern- und Western-Blotting. Die Porengrößen von Nitrocellulosemembranen reichen von 3 bis 20 um. Mikroporöse Membranen aus Nitrocellulose erleichtern den Nachweis der immunochemischen Reaktion, die auf der Oberfläche der Membran stattfindet. Daher werden Nitrocellulosemembranen häufig zur Immobilisierung von Proteinen und zum Nachweis spezifischer Proteine im Western Blotting verwendet. Nitrocellulosemembranen können auch Glycoproteine und Nukleinsäuren immobilisieren.

Nitrocellulosemembranen werden aufgrund verschiedener Merkmale in Querströmungsassays bevorzugt. Nitrocellulosemembranen nehmen Proteine in hoher Konzentration auf. Das Lösungsmittel, das zum Befeuchten der Membran verwendet wird, verringert die Absorption der Nitrocellulosemembranproteine nicht. Nitrocellulosemembranen können leicht auf die gewünschte Gelgröße geschnitten werden und Proteine durch elektrische oder kapillare Übertragung vom Gel auf die Membran übertragen werden. Nitrocellulose ermöglicht einen schnelleren Fluss von Proteinen durch die Membran mit hohem Bindungspotenzial. Nitrocellulose zeigt eine verbesserte Handhabungsfestigkeit. Eine weitere Besonderheit von Nitrocellulosemembranen ist, dass sie mit wasserfreien, lösungsmittelfreien Klebstoffen auf verschiedene Kunststoffträger geklebt werden kann.

Abbildung 01: Nitrocellulosemembran für Western Blotting

Was ist PVDF??

Polyvinylidendifluorid (PVDF) ist ein Fluorpolymer, das durch Polymerisation von Vinylidendifluorid hergestellt wird, und besitzt eine hohe Immobilisierungsfähigkeit von Proteinen. Daher werden mikroporöse Membranen aus PVDF in Western-Blotting-Techniken verwendet, um spezifische Proteine aus den Proteingemischen zu analysieren. PVDF-Membranen können auch zur Aminosäureanalyse und Proteinsequenzierung verwendet werden. Das wichtigste Merkmal einer PVDF-Membran gegenüber einer Nitrocellulosemembran ist, dass sie leicht von den Antikörpern abgezogen und für nachfolgende Antikörpersonden wiederverwendet werden kann.

PVDF-Membranen sind dicker als Nitrocellulosemembranen; Daher resistenter gegen Beschädigungen bei der Wiederverwendung. PVDF-Membranen sind stark hydrophob. Daher müssen sie vor der Verwendung in Methanol oder Isopropanol getränkt werden.

Was ist der Unterschied zwischen Nitrocellulose und PVDF??

Nitrocellulose gegen PVDF
Nitrocellulose ist ein Polymer aus Cellulose.	PVDF ist ein Fluorpolymer, das durch Polymerisation von Vinylidendifluorid hergestellt wird.
Membranporengröße
Typische Porengrößen sind 0,1, 0,2 oder 0,45 µm	Typische Porengrößen sind 0,1, 0,2 oder 0,45 µm
Proteinbindungskapazität
Nitrocellulose hat eine Proteinbindungskapazität von 80 bis 100 μg / cm².	PVDF hat eine Proteinbindungskapazität von 170 bis 200 μg / cm².
Empfindlichkeit
Dies hat im Vergleich zu PVDF eine geringe Empfindlichkeit.	Dies hat eine hohe Empfindlichkeit.
Nachweis niedrig exprimierter Proteine
Da die Empfindlichkeit in Nitrocellulosemembranen gering ist, eignet sie sich nicht zum Nachweis niedrig exprimierter Proteine.	Dies eignet sich aufgrund seiner hohen Empfindlichkeit besser für den Nachweis niedrig exprimierter Proteine.
Hintergrundgeräusche
Dies hat geringere Hintergrundgeräusche	Dies hat ein höheres Hintergrundrauschen.
Wechselwirkungen mit Proteinen
Proteinmoleküle binden an Nitrocellulosemembranen durch hydrophobe Wechselwirkungen.	Proteine binden an PVDF-Membranen durch hydrophobe und Dipolwechselwirkungen.
Natur der Membran
Nitrocellulose ist spröde und zerbrechlich. Es sind jedoch Versionen von Nitrocellulose erhältlich, die beständig sind.	PVDF ist haltbarer und hat eine höhere chemische Beständigkeit.
Möglichkeit zum Abisolieren und Wiederverwenden
Nitrocellulose hat möglicherweise Schwierigkeiten beim Ablösen und Wiederaufnehmen, ohne das Signal zu verlieren.	PVDF ist ideal für Nachbearbeitungs- und Sequenzierungsanwendungen.
Eignung
Nitrocellulose ist ideal für den Nachweis von Proteinen mit niedrigem Molekulargewicht.	PVDF eignet sich besser zum Nachweis von Proteinen mit höherem Molekulargewicht.
Andere Verwendungen
Nitrocellulose kann zur Nukleinsäureanalyse und zum Dot / Slot-Blotting verwendet werden.	PVDF kann für Proteinsequenzierungs- und Festphasenassaysysteme verwendet werden.
Kosten
Dies ist günstiger als PVDF-Membranen.	Dies ist teurer als Nitrocellulosemembranen.
Notwendigkeit zur Vorbenetzung
Nitrocellulosemembranen erfordern keine Vorentnahme mit Methanol	PVDF-Membranen erfordern eine Vorbehandlung mit Methanol.

Zusammenfassung - Nitrocellulose vs PVDF

Nitrocellulosemembranen waren die ersten kommerziell für den Lateral Flow Assay verwendeten Membranen. Sie haben eine hohe Fähigkeit, Proteine zu absorbieren. Daher werden beim Western Blotting Nitrocellulosemembranen verwendet. PVDF ist ein anderer Membrantyp, der beim Western Blotting verwendet wird, und hat auch eine hohe Proteinabsorptionskapazität. Beide Arten werden im Western Blot zur Proteinanalyse verwendet. PVDF-Membranen weisen jedoch mehr spezielle Eigenschaften auf, wodurch sie für Western-Blotting besser geeignet sind als Nitrocellulosemembranen. Nitrocellulosemembranen eignen sich jedoch besser zum Nachweis von Proteinen mit niedrigem Molekulargewicht, PVDF-Membranen sind besser zum Nachweis von Proteinen mit hohem Molekulargewicht geeignet. Dies ist der Unterschied zwischen Nitrocellulose- und PVDF-Membranen.

Bildhöflichkeit:
1. "Western Blot transfer" Von Bensaccount in der Wikipedia auf Englisch (CC BY 3.0) über Commons Wikimedia

Referenz:
1. Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun und Thomas A. Neubert. "Verwendung von Nitrocellulosemembranen zur Proteincharakterisierung durch matrixunterstützte Laserdesorption / Ionisations-Massenspektrometrie." Analytische Chemie. US National Library of Medicine, 15. Juli 2006. Web. 28. März 2017
2. "Molekulare Marker und Pflanzenbiotechnologie". Google Books. N.p., n. D. Netz. 28. März 2017
3.Montag, 8. April 2013 Tweet. „Die Magie in der Membran: Wählen Sie die besten Ergebnisse für den Best Western Blot.“ Biocompare. Nr., 08 Apr. 2013. Web. 28. März 2017

Molekularbiologie