Unterschied zwischen Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC

Das Hauptunterschied zwischen umgekehrter Phase und normaler Phase HPLC ist das Umkehrphasen-HPLC verwendet eine polare stationäre Phase und eine weniger polare mobile Phase, wohingegen die Normalphasen-HPLC eine unpolare stationäre Phase und eine polare mobile Phase verwendet.

Die Normalphasen-HPLC ist die älteste HPLC-Technik, die Tswett in seinen Trennungen von Pflanzenextrakten verwendete. er benutzte Kreide in einer Glassäule. Dies war die klassische Art der Chromatographie, die dazu führte, sie als "normale" Technik zu bezeichnen. Umkehrphasen-HPLC ist dagegen das Gegenteil der normalen Technik, die Wissenschaftler in letzter Zeit entwickelt haben.

INHALT

1. Übersicht und Schlüsseldifferenz
2. Was ist Umkehrphasen-HPLC?
3. Was ist Normalphase-HPLC?
4. Side-by-Side-Vergleich - Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC in Tabellenform
5. Zusammenfassung

Was ist Umkehrphasen-HPLC??

Umkehrphasen-HPLC ist eine chromatographische Technik, bei der eine hydrophobe stationäre Phase verwendet wird. Bei allen HPLC-Methoden verwenden wir diese Methode aufgrund ihrer breiten Anwendbarkeit und Reproduzierbarkeit zu etwa 70%. Die stationäre Phase ist unpolar und die mobile Phase ist polar.

In den meisten Fällen verwenden Wissenschaftler eine wässrige Mischung aus Wasser mit einem mischbaren polaren organischen Lösungsmittel wie Acetonitril oder Methanol als mobile Phase. Daher interagieren die Analyten mit der unpolaren stationären Phase.

Was ist Normalphase-HPLC??

Normalphasen-HPLC ist eine chromatographische Technik, bei der eine hydrophile stationäre Phase verwendet wird. Es ist die traditionelle Methode der HPLC, obwohl wir sie nicht so oft verwenden. Die stationäre Phase ist polar und die mobile Phase ist unpolar. Noch wichtiger ist, dass die mobile Phase dieser Technik zu 100% organisch ist. Das bedeutet, dass dafür kein Wasser verwendet wird.

Abbildung 01: Ein Probenprofil für Normalphasen- und Umkehrphasen-HPLC-Chromatogramme gemäß der Polarität der Komponenten im Analyten.

Typischerweise enthält die stationäre Phase Siliciumdioxid, Cyano, Diol, Amino-gebundene Phasen usw. Zu den mobilen Phasen gehören organische Lösungsmittel wie Hexan, Ethylacetat usw. Diese Technik beruht auf der Rückhaltung von Lösungsmittel- oder Analytmolekülen auf der polaren stationären Phase.

Was ist der Unterschied zwischen der Umkehrphasen- und der Normalphasen-HPLC?

Umkehrphasen-HPLC ist eine chromatographische Technik, bei der eine hydrophobe stationäre Phase verwendet wird. Die stationäre Phase dieser Technik ist unpolar. Die stationäre Phase ist unpolar, während die mobile Phase polar ist. Darüber hinaus verwenden Wissenschaftler eine wässrige Mischung aus Wasser mit einem mischbaren, polaren organischen Lösungsmittel wie Acetonitril oder Methanol als mobile Phase bei der Umkehrphasen-HPLC. Die Normalphasen-HPLC ist dagegen eine chromatographische Technik, bei der eine hydrophile stationäre Phase verwendet wird. Die stationäre Phase dieser Technik ist polar. Die stationäre Phase ist polar, während die mobile Phase unpolar ist. Darüber hinaus verwenden Wissenschaftler organische Lösungsmittel wie Hexan, Ethylacetat usw. als mobile Phase der Normalphasen-HPLC. Die folgende Infografik zeigt den Unterschied zwischen der HPLC mit umgekehrter Phase und normaler Phase in Tabellenform.

Zusammenfassung - Reverse Phase vs. Normal Phase HPLC

Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC-Techniken sind zwei Flüssigchromatographietechniken. Der Unterschied zwischen Umkehrphasen- und Normalphasen-HPLC besteht darin, dass die Umkehrphasen-HPLC eine polare stationäre Phase und eine weniger polare mobile Phase verwendet, während die Normalphasen-HPLC eine unpolare stationäre Phase und eine polare mobile Phase verwendet.

Referenz:

1. Wasser "HPLC-Separationsmodi". HPLC - Hochleistungsflüssigchromatographie: Waters. Hier verfügbar  
2. "Normalphasen-Flüssigchromatographie zur Trennung von Isomeren und Verbindungen, die in wässriger Umgebung instabil sind." Normal_Phase_LC. Hier verfügbar